请教各位蛋白纯化高手,我最近在纯化一个蛋白,但是过完Ni柱之后总有一个杂蛋白除不去,通过梯度洗脱发现它似乎和我的蛋白的结合能力一样,怎么都没法除掉它,让我很是苦恼,请问各位高手出出主意,碰到
谁能告诉我,蛋白有寿命吗?或者蛋白酶有多猛?我的重组蛋白(GST融合),经过包涵体变复性后,用谷胱甘肽-琼脂糖FF结合富集,然后洗脱,洗脱液立即上样电泳,结果检测到了目的条带,而且纯度很高,相当明显
分子克隆第三版1248页的疑难解析里的内容是关于“不溶性蛋白”“不溶的GST融合蛋白(如果诱导后可以检测到而亲和层析纯化后检测不到,可以认为是不溶的;或者通过分级分离确定)要吧用下列去污剂溶解
订购的一个试剂盒,说明书上写明检测样本为:nuclear extract或者是purified protein,很迷惑,我该从细胞样本中提取核蛋白还是总蛋白来进行检测呢?
昨天做蛋白可溶性分析,发现在上清中和沉淀中都有我诱导的蛋白,只是在上清中量少一点。奇怪的是我的诱导的目的蛋白是31KD左右,在20KD也有一条诱导的带(原因不知,可能是稀有密码子造成的翻译提前终止
本人想研究重组的目的蛋白与细菌蛋白能否发生结合,计划是让两者同时过镍柱,后进行洗脱,如果两者能出现特异性条带则证明有结合,不知道行不行的通,并且没有找到相应的文献参考,求高人指点啊
我想请教一下,我最近在纯化蛋白,纯出来的蛋白只有单一一条带,但是却比我的目的带大了,目的带是大约34-35KDa,可现在纯出来的是在44KDa 和66KDa 之间,我也不知道是为什么,想请教高手指点
近期看了一些挤压综合征的资料,发现 肌红蛋白 与 肌球蛋白 的概念 不甚明确,先后查了 百度,生理学,生物化学;均没有发现明确的区别。请各位大神 赐教 肌红蛋白 与 肌球蛋白的 相同点与不同点。万分