大家好,有没有遇见过:镍柱纯化蛋白,纯化完超滤置换buffer,首先超滤时候没有一下子浓缩,有一点点补充的置换保证浓度不会很高,而且本身浓度也不高,1mg/ml左右。可是超滤换buffer时候就会
一开始内参β-actin孵的还挺好,但找不到应该在65kDa的NF-Kb。做了几次无果之后我转膜孵整条泳道找几个目的蛋白位置,并且做了考马斯亮蓝染色。结果所有抗体的高信号在下端,但也不是最前端
目前在尝试提取小鼠肠道蛋白,但是第一次提取跑蛋白发现内参及目的蛋白均为空白,考虑可能是提取蛋白失败,有木有宝子有经验可以分享下,关于肠道蛋白提取经验,目前在已学习到经验po上,请赐教~,非常
我的目的蛋白大概是 70kd 左右,在 C 端带 his-tag,上面 WB 的膜是敷的 his 的抗体.但是条带位置在 10 几 kd,是在细胞内被别的酶酶切了,要怎么检测一下,求大家指教。