跑了两次wb,每次两块胶,跑出来的内参都是两条带,用的Proteintech的鼠抗,Fermentas Marker ,两条带分子量:上面在55到40kd,下面在40到35kd之间,求助大神出现杂带
测浓度后取了100ng做连接。这两种方法也进行了对照。4.连接反应用的是Fermentas公司的T4连接酶,酶切后质粒取50ng,室温一小时,室温一小时后放4℃过夜连接都做了。5.转化感受态的时候先
老是在限制酶的说明书上看到”N fold overdigestion“, 是什么意思啊?如”100-fold overdigestion“今天又在fermentas的网站上看到”Star
退火成粘性末端,后与载体连接,但是成功率超级低,几乎为0.。。。如果哪位大虾有经验的话,请指教。。(对引物加不加PNK都做过,用Takara的SolutionI和Fermentas的T4 ligase
提取RNA之后用fermentas的Dnase 酶消化去除基因组DNA污染,按照说明书操作,然后跑胶,RNA无降解,孔附近也无亮带(本以为是无基因组DNA了)。然后逆转录cDNA,做了一个不加逆转
最近用fermentas的这两种内切酶构载体,结婚重组载体转化子菌检跑胶全无带,提质粒发现全是空载,第一次出现这个问题,难道这两种酶不能同时切?以前用过xba I没问题的,莫非是nco I的问题?酶
话说前段时间RP暴差,不曾出现问题的“加A尾后T-A cloning”怎么都做不出。于是当时就试了一下传说中效率很低要更拼RP的平末端连接。。申请到了Fermentas的T4连接
我有很多170左右的蛋白要跑,但是已有的marker最大只到170,(比如fermentas的26616)我想买到190或到200的marker,下限20就行,请教大家买的哪家的,先谢过了!!