最近构建一个载体，骨架5kb片段3kb，第一次25℃4h第二次16℃16h，第一次没有长斑，第二次长了两个斑但是测序不对是不是因为载体的量不够呢，因为两次载体我都没用到50ng，但是实验室其他同学
由于保存不当，原始载体已经丢失，现在手里只有插入了目的基因的重组载体。想请问下各位，我是否可以将重组载体中的目的基因切除（使用的酶是Xho I 和BamH I），获得的质粒骨架重新接连？
载体有克隆载体和表达载体之分，表达载体是在克隆载体的基础上增加了表达原件吗？那么为什么不直接用表达载体就可以了。我看到有些信息上写表达载体没有酶切位点，那么表达载体不是在克隆载体的基础上构建
由于载体上的酶切位点可选的有限，选了紧邻的两个酶切位点（HpaI和EcoRI），采取的是分步酶切且酶切过夜，但是就是连接转化失败，拿连接产物跑胶也看得到连接成功的条带，想知道到底是啥原因
同盟：我有段目的基因连接于PMD-T载体上，现希望切下来与表达载体PBIN438连接，但这段目的片断约2500bp 与PMD-T（2692bp)大小差不多.切胶回收困难。因此，我用双酶切后，不想做切
构建重组质粒，目的基因100bp，与载体7:1比例连接后转化，载体低拷贝，24h长出一个单菌落，36小时左右又长出许多单菌落，单克隆验证验证5个有条带扩培仅3个浑浊，因为提拷贝，所以扩培时500uL
以pet28a为载体构建了质粒转化后在kana平板上长出了单克隆，但是挑单克隆摇菌（kana浓度50ug/ml）长不出来是怎么回事呀，每个单克隆确定挑中了，摇菌300rpm，37℃，12个小时，培养