近期利用诺唯赞Exnase重组酶进行同源重组构建某基因CDS序列的载体时出现了以下问题:正常重组、大肠转化涂板流程后,挑菌p阳性菌落送测,发现测序结果仅前200bp左右与目的基因CDS序列匹配,后续
shRNA退火连接后再与PLKO.1连接后每次做酶切验证(NdeI和EcoRI)都没有看到一百多的条带,是一直没有连接成功吗,两个酶切位点是连接后都还在载体上的,没连接成功应该也会有个几十的条带
👉戳此收藏订阅过表达载体的构建👉戳此收藏订阅过表达载体的构建👉戳此收藏订阅过表达载体的构建简介过表达载体是将目的基因 CDS 编码区构建到相应的质粒或者病毒载体中,从而在宿主细胞中高效表达大量
最近在做重组质粒构建,老师给的原方案是“双酶切得目的片段—双酶切载体,得黏性末端缺口—T4连接酶连接”,但是载体双酶切后只小了20bp,不好切,也没法验证切没切下来,只能直接盲连,然后转化筛选测序
同源重组载体构建法是我在分子克隆-载体构建概要里讲得三种重要得载体构建方法之一,相比双酶切载体构建方法,同源重组法引物设计较为复杂,但省去了双酶切和连接等耗时操作,并且不受酶切位点限制,位置选择比较
我从公司买了一个敲除的线性载体试剂盒,他需要连接一段sgRNA在载体的U6启动子后面进去成为环状载体,我现在需要一个空载,但公司不给,我可以自己一段比如终止子序列进去去形成一个环状载体么?
天根小提中量试剂盒提取菌体中的质粒,浓度300ng/μl(相比实验室之前的偏低),凝胶电泳没有条带,阳性对照有(但不是很明显),请问是质粒本身载体的质量不好导致的吗?菌体肉眼看量也不少,难道全是杂菌