由于实验需要，现在开始做realtime PCR，有两个问题请教一下各位有经验的同志们：1、我已经做了一批预实验，用的是Fermentas的逆转录kit和TOYOBO的定量试剂盒，模板浓度为0.5
于杭州四季青公司;四甲基偶氮唑蓝(MTT)购于Sigma公司;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒购于Fermentas公司;Trizol试剂盒购于美国Invitrogen公司;引物由上海生工生物
我买的PCR试剂盒Fermentas K0211快速PCR，请教PCR反应程序（变性，退火，延伸等的温度与时间）：引物 GR, 607 bp (sense : 5’-GATTCCAAGCAGCAGA
Tris 5.8g，SDS 0.37g，恒压100V转移100分钟，目的蛋白分子量17KD，内参为GAPDH。marker采用fermentas的marker系统，marker在转膜后在膜上清晰显现
酶切位点，第三个片段上游加HindIII酶切位点，下游未加任何酶切位点，用Fermentas的T4连接酶16度连接16h，65度灭活10min。 用此连接产物（2200bp）做模板，第一个片段