pLKO.1 TRC-cloning vector2 μL 10x T4 DNA ligase buffer(Fermentas)0.5 μL T4 DNA ligase
以前刚刚做分子生物的时候,碰到要做双酶切KpnI和XhoI,从fermentas(现在属于thermo fisher)网站查的double digest推荐方法,结果居然没看太懂,后来在他们的网站
求助,最近一直在做PLKO-tet —0n 载体的双酶切,用ECORI 与AGEI酶切,酶切后电泳胶回收,可是回收质粒的浓度非常低13ng/ul,酶切反应体系是fermentas公司的快速酶切反应
因为载体上只有这两个酶切位点,而且间隔很近只有15bp,我在PCR引物的两端设计了这两个酶的酶切位点,我用的是fermentas的内切酶,用的通用buffer,酶切3-4h,跑胶看载体是切开
有谁能告诉我PGL3-control质粒转染那种真核细胞其转染率高,且表达量高?用的是那种转染试剂?谢谢了我目前转染的细胞是A549肺癌细胞,转染试剂是Fermentas,但是转染效率似乎很低,表达
线性化,然后T7转录酶(fermentas)进行转录,但是无法转录得到正确大小的片段,电泳图显示转录之后的RNA条带的大小在marker500 bp的位置以下,无论是跑变性胶还是跑非变性胶
(由于这两个酶为不同公司的,所以选择了分步酶切): 1.T载体 20ul ,XbaI(fermentas) 2ul,10*buffer tango 4ul,补水至40ul 37度
各位高手能否帮我解答这个问题,我要测的蛋白大小是38kd,用的是abcam的一抗,marker是Fermentas家的,同一张膜上做了GAPDH(37kd)和这个蛋白,GAPDH出在36kd下面