将目的基因和T载体连接,测序成功的菌液提取质粒进行双酶切与表达载体连接,通过菌落PCR和质粒酶切验证正确,送测序,用载体上的反向引物测序,结果酶切位点speI处的碱基A丢失了。由于该酶切位点附近
请教各位老师们:如图,在构建表达质粒的时候设计HindIII酶切位点+cozak序列(GCCACC)+ATG+flag序列在snapgene里看的时候起始密码子ATG在cozak序列里,flag序列第
第一个和第四个孔是未切的质粒第二第三是第一个孔酶切产物(2和3用的是不同的内切酶)第五和第六个孔是第四个孔酶切产物(5和6用的是不同的内切酶)问题:1.请问条带是切开了吗?2.哪个酶是不是切的不充分呢
跑胶顺序1-M(5000bp大小)2-连接产物(片段和载体 双酶切后T4连接酶连接)3-片段(690bp 双酶切胶回收产物)4-载体(4985bp 双酶切胶回收产物)问题🙋♀️:1号链接产物为啥
我是合成的两条单链,打算用同源重组的方式构建到载体上,两条单链中的一条链是由所要连接的载体同源壁15bp➕酶切位点➕我要连接到载体上的小片段40bp,另一条链同理,两条单链以引物的形式收到,后面
各位大佬!!我最近一个月都在构建原核克隆载体,双酶切成功,只是回收浓度比较低,基因浓度12ng/ul(小片段200多),载体(pet28a)浓度10ng/ul,连接比例1:5,1:8,1:10,转化
各位未来院士好,小弟最近要做海水青鳉的mapk1基因的过表达实验。有几个问题想请教一下大家。1酶切位点的选择,看网上说明书有说到绿色荧光基因的酶切位点,是不是荧光基因的酶切位点就不能选择了?2目的基因
从理论上来说,载体的构建没有太大的技术难度,但是它的成功与否有时候是一个玄学的过程,有一定程度上的运气成分,有时候“胡乱”操作一通反而莫名其妙地构上去而且转化成功了。那么在具体的应用中,质粒载体